Hepatiitti C: n PCR-analyysi

Virushepatiitti C on yksi vaarallisimmista ja vaikeimmin diagnosoitavissa olevista sairauksista. Ongelmana on, että usein tämä tauti havaitaan vasta myöhemmissä vaiheissa johtuen siitä, että sen päämuoto on krooninen ja CHC on oireeton. Varhainen diagnoosi antaa kuitenkin mahdollisuuden valita sopivin hoito, joka auttaa sinua unohtamaan viruksen maksatulehduksen ikuisesti..

Yksi monipuolisimmista menetelmistä HCV: n määrittämiseksi on polymeraasiketjureaktio (PCR). Mutta mikä on hepatiitti C: n PCR-analyysi? Mitkä ovat tämän testauksen ominaisuudet? Kuinka hepatiitti C: n PCR-analyysi eroaa laadullisesti kvantitatiivisesta? Kuinka testitulos tulkitaan? Löydät vastaukset kaikkiin näihin kysymyksiin artikkelistamme..

HCV-diagnoosi PCR: llä

Polymeraasiketjureaktio on yksi yleisimmistä ja tarkimmista menetelmistä HCV: n diagnosoimiseksi. Mutta mitä hepatiitti C: n PCR-testi osoittaa? Testitulosten avulla voidaan määrittää flavaviruksen esiintyminen isännän kehossa sekä viruskuormituksen aste kehossa..

Analyysiin käytetään näytettä potilaan laskimoverestä, joka on otettu tutkimuspäivänä. Hepatiitti C: n PCR-testin ottamista suositellaan seuraaville ihmisryhmille:

  • Potilaat, joilla on havaittu immunoglobuliineja HCV: n aiheuttajan antigeeneille
  • Naisille raskauden aikana
  • Lääketieteelliset työntekijät, jotka ovat jatkuvasti yhteydessä tartunnan saaneisiin kehon nesteisiin
  • Potilaat, joilla on aiemmin ollut parantunut virushepatiitti
  • Potilaat, joilla on ilmeisiä maksavaurion oireita

Hepatiitti C: n PCR-testi voi olla kvalitatiivinen tai kvantitatiivinen. Molempia menetelmiä käytetään aktiivisesti HCV: n diagnosoinnissa. Tarkastellaan yksityiskohtaisemmin hepatiitti C: n kvalitatiivisen ja kvantitatiivisen PCR-analyysin ominaisuuksia.

Laadullinen testaus

Laadullinen vaste suoritetaan, jos aiemmin määritetty HCV-diagnoosi vaatii vahvistusta. Testitulokset voivat olla positiivisia ja negatiivisia. Positiivinen reaktio osoittaa tarttuvan aineen läsnäolon kohteen kehossa. Negatiivinen tulos puolestaan ​​osoittaa joko taudinaiheuttajan puuttumisen tai sen merkityksetöntä pitoisuutta..

Mikä on hepatiitin PCR (kvalitatiivinen määritys)? Tämä testaus auttaa määrittämään diagnoosin lopullisesti. Sen toteuttamisen kustannukset Moskovassa vaihtelevat klinikasta riippuen 1800-3000 ruplaa.

Määrällinen vaste

Veri kvantitatiiviselle polymeraasiketjureaktiolle luovutetaan, jos diagnoosi on jo määritetty. Analyysin avulla voit määrittää patogeenisen kuormituksen potilaan kehossa tällä hetkellä. Täten hoitava lääkäri saa tietoa siitä, mihin maksa-alueeseen flavavirus vaikuttaa, ja voi valita tietyssä tapauksessa tarvittavan hoito-ohjelman..

Mitä korkeammat taudinaiheuttajan parametrit ovat potilaan veressä, sitä vakavampaa taudin vaihe on hoidettava. Kvantitatiivisen polymeraasiketjureaktion kustannukset Moskovan klinikoilla vaihtelevat 1800-4000 ruplaan lääketieteellisen laitoksen valinnasta riippuen.

Valmistautuminen hepatiitti C: n PCR-testiin

Joten vastaus kysymykseen "Mikä on hepatiitti C: n PCR-analyysi?" löytyi. Mutta miten valmistaudut tulevaan diagnoosiin? Valmistellessaan verinäytteen luovuttamista hepatiitti C: n PCR-testiä varten potilaan tulee:

  • Jätä muutama päivä ennen laboratorioon saapumista pikaruokaa sekä muita raskaita ja rasvaisia ​​ruokia
  • Älä juo alkoholia äläkä tupakoi 24 tunnin sisällä ennen hepatiitti C: n PCR-testin tekemistä
  • Älä syö 8 tuntia ennen diagnoosia
  • Oman turvallisuutesi vuoksi, ennen kuin pistät injektioneulan laskimoon, varmista, että terveydenhuollon työntekijä käyttää vain steriiliä kertakäyttöistä ruiskua

Polymeraasiketjureaktiota varten otetaan hyvin vähän verta. Siksi toimenpiteen jälkeen potilas ei tarvitse kuntoutusta. Siksi heti toimenpiteen jälkeen potilas menee kotiin. Diagnoosi suoritetaan aamulla.

Dekoodaa PCR-analyysi

Hepatiitti C: n PCR-testin dekoodaus suoritetaan lääketieteellisessä laboratoriossa. Virhemarginaali lopullisissa tuloksissa riippuu terveydenhuollon työntekijöiden pätevyydestä ja siitä, miten kohde noudatti testaukseen valmistautumisen sääntöjä..

Hepatiitti C: n kvalitatiivisen PCR-analyysin dekoodaamisen yhteydessä on tärkeää ottaa huomioon reagenssien herkkyysraja, joka vaihtelee 10-500 IU / ml: n sisällä. Hyvälaatuisella polymeraasiketjureaktiolla voi olla vain 2 tulosta:

  • Positiivinen. Virushepatiitti C -diagnoosi vahvistetaan havaitsemalla flavavirus potilaan verestä. Patogeenin pitoisuus veriplasmassa on riittävä diagnoosin tekemiseksi. Jos diagnoosi tehtiin hoidon jälkeen, tällainen tulos osoittaa hoidon tehottomuuden..
  • Negatiivinen. Taudinaiheuttajaa ei ole tai sen pitoisuus veressä on erittäin matala. Tällainen tulos ei aina osoita infektion puuttumista. Kohteen suositellaan läpäisevän lisätestit reagenssien herkkyydelle.

Jos haluat selvittää, mitä hepatiitti C: n PCR-analyysi osoittaa kvantitatiivisessa testauksessa, sinun on aloitettava keskimmäisestä indikaattorista, joka on yhtä suuri kuin 8x10 ^ 5 IU / ml (800000 IU / ml).

Jos patogeenisen kuormituksen taso on alle tai yhtä suuri kuin keskiarvo, potilaalle määrätään lääkehoito, joka perustuu suoriin viruslääkkeisiin. Jos luku on yli 800 000 yksikköä, hoitavan lääkärin on ajateltava vakavampia toimenpiteitä HCV: n torjumiseksi. Potilas saattaa tarvita maksansiirron.

Virushepatiitti C: n määrittäminen PCR: llä suoritetaan monissa pääkaupungin lääketieteellisissä laitoksissa. Samaan aikaan testaus voidaan tehdä sekä sairaalassa että avohoidossa..

Hepatiitti C: n PCR-analyysi: missä ja miten se siirretään oikein, mikä tarkoittaa positiivista ja negatiivista tulosta

Hepatiitti C: n PCR on pakollinen analyysi tutkittaessa potilasta, jolla on maksavaurion oireita. Tutkimus on määrätty diagnoosin vahvistamiseksi ja kattavimpien tietojen saamiseksi taudin aiheuttajasta, virusinfektion aktiivisuudesta. Tulokset ovat pohjana antiviraalisen hoidon määrittelemiselle, sen keston määrittämiselle ja tehokkuuden arvioinnille..

Polymeraasiketjureaktiotekniikkaa käyttävä diagnoosi on yleistynyt suhteellisen äskettäin. Tätä aihetta on tutkittu 1970-luvun puolivälistä lähtien. Ensimmäiset julkaisut PCR: n käytön mahdollisuudesta käytännön lääketieteessä ilmestyivät vasta 1980-luvun puolivälissä..

  • PCR-tyypit
  • Testin käyttöaiheet
  • Minne viedä?
  • Verenluovutusta koskevat säännöt
  • Tulosten dekoodaus
  • Plussat PCR-diagnostiikasta
  • Kustannukset

Selitettäessä mitä PCR on, lääkärit korostavat, että tämä on luotettavin ja luotettavin hepatiitti C -analyysi. Tämä testi mahdollistaa paitsi viruksen RNA-hiukkasten tunnistamisen myös sen pitoisuuden (osoittaa tarttuvan prosessin aktiivisuuden) ja genotyypin. Saadut tulokset ovat avainasemassa jatkohoidon taktiikan ja suunnitelman määrittämisessä..

Mikä on reaktion järjestämisen ydin? Tiettyjen biologisesti aktiivisten aineiden avulla saavutetaan viruksen RNA-hiukkasten määrän kasvu pienessä määrässä verta. Myöhemmin genomin osat määritetään erilaisilla fysikaalis-kemiallisilla menetelmillä.

PCR suoritetaan käyttämällä useita komponentteja:

  • Pohjustus. Tämä on keinotekoisesti syntetisoitu yhdiste, jossa nukleotidisekvenssi on täysin identtinen viruksen RNA: n spesifisen alueen kanssa, jossa ei tapahdu mutaatioita ja muutoksia genotyypistä riippuen. Hepatiitti C -viruksen RNA: n määrittäminen suoritetaan käyttämällä tiukasti spesifistä aluketta.
  • RNA-polymeraasi. Entsyymi, jolle on tunnusomaista stabiilisuus ja rakenteellinen vakaus kemiallisen reaktion oikeaan kulkuun tarvittavien lämpötilamuutosten taustalla. Tarjoaa RNA-ketjun rakentamisen yhdessä PCR-vaiheista.
  • Proteiinisekoitus. RNA: n lisäosien rakentamiseksi tarvitaan "rakennusmateriaalia", jonka biologiseen näytteeseen lisätään tiettyjä proteiinirakenteen yhdisteitä.
  • Puskuri. Seos, joka ylläpitää optimaalisen pH-tason polymeraasiketjureaktion virtauksen varmistamiseksi.
  • Näyte biologisesta materiaalista, jonka epäillään sisältävän HCV (hepatiitti C -virus) RNA-näytteen.

Joissakin PCR-vaiheistamismenetelmissä käytetään lisäksi RNA-koettimia ja muita sisäisiä kontrolleja, joita käytetään kontrollinäytteinä tuloksia tunnistettaessa.

Aivan prosessia, jolla virus-RNA: n alueita lisätään matriisia käyttämällä, kutsutaan monistukseksi. Reaktio etenee useissa vaiheissa:

  1. Denaturoiva. RNA-säikeiden "purkaminen" saadaan aikaan nostamalla lämpötila tietylle tasolle.
  2. Hehkutus. Kun lämpötila on laskettu vaadittuihin arvoihin, alukkeet kiinnittyvät RNA: han. Tämä vaihe on mahdollinen vain, jos verinäytteessä on haluttuja viruspartikkeleita..
  3. Viruksen RNA-alueiden suora synteesi entsyymien osallistumisella.

Luetellut PCR-vaiheistussyklit toistetaan useita kymmeniä kertoja, mikä antaa hepatiitti C -patogeenin RNA-alueiden lukumäärälle moninkertaisen kasvun laboratoriomenetelmillä määritetyn tason.

Verinäyte valmistetaan asianmukaisesti ennen testausta. Sisältyvä RNA adsorboidaan kantajapuskuriin, pestään sitten pois ja käytetään polymeraasiketjureaktion aloittamiseen.

Tulokset havaitaan joko elektroforeesilla (vaaka- tai pystysuora) tai hybridisaatiolla. Menetelmä reaktion tulosten dekoodaamiseksi valitaan tutkimuksen tavoitteiden perusteella (yksinkertaisesti tunnistamalla RNA tai määrittämällä sen likimääräinen määrä).

PCR - tarkin verikoe hepatiitti C: lle

Ehdotettujen HCV-tutkimusten luettelo sisältää useita kohtia, jotka eroavat toisistaan ​​kustannusten, valmiusajan ja toteutustavan suhteen..

Jos viitataan Maailman terveysjärjestön (WHO) protokolliin, infektion diagnosointimenettely sisältää useita peräkkäisiä vaiheita..

Aluksi vuokraa:

  • veren ja virtsan yleinen analyysi;
  • veren biokemia;
  • tutkimus glukoosipitoisuudesta (ehdottomasti tyhjään vatsaan);
  • HIV-testi;
  • fluorografia;
  • immunogrammi (jos epäilet autoimmuunisairauksien esiintymistä).

Jos biokemiallisen verikokeen parametrit poikkeavat fysiologisesta normista, potilaalle määrätään testi, joka perustuu viruksen ja veren kosketuksessa tuotettujen spesifisten vasta-aineiden havaitsemiseen (ELISA)..

Mutta tällaisella veritutkimuksella hepatiitti C: lle on merkittävä haittapuoli. Vasta-ainesynteesin prosessi riippuu immunokompetenttien solujen toiminnasta ja tuotannosta. Kehon yksilölliset ominaisuudet voivat aiheuttaa sekä vääriä negatiivisia että vääriä positiivisia vastauksia..

Ennen ELISA-testin määräämistä lääkäri kertoo potilaalle mahdollisesta virheestä, joka herättää vastauskysymyksen: "Mikä verikoe osoittaa hepatiitti C: tä minimaalisella vaaralla saada virheellisiä tuloksia?" Diagnoosin vahvistamiseksi tai kumoamiseksi tarkin laboratoriotesti on reaaliaikainen PCR.

Muut toimintatavat riippuvat siitä, mitä tutkimus osoittaa. Jos diagnoosi on vahvistettu, potilaalle määrätään välittömästi hepatoprotektorit, varoitetaan oikean ravitsemuksen ja terveellisen elämäntavan tärkeydestä. Kohdennettu hoito on kuitenkin mahdotonta määrittelemättä viruskuormituksen tasoa ja hepatiitti C-genotyyppiä..

Jotkut lääkkeet voivat aiheuttaa hepatiitti B: n pahenemisen. Siksi komplikaatioiden poissulkemiseksi HBsAg-testit määrätään lisäksi. HCV: tä hoidetaan vasta negatiivisen testituloksen jälkeen.

Laji: kvalitatiivinen, kvantitatiivinen ja genotyypin määritys

Hepatiitti C: n alkudiagnoosissa tuotettujen vasta-aineiden tiitteri määritetään serologisella menetelmällä. Tämä tulos osoittaa karkeasti patologisen prosessin aktiivisuuden. Mutta lääkäri voi saada tarkimmat tiedot vasta tutkittuaan PCR-tiedot.

Tällä hetkellä analyysi suoritetaan melkein kaikissa laboratorioissa ultraherkällä menetelmällä. Siten HCV: n diagnoosi on mahdollista 10-14 päivän kuluessa infektion jälkeen, harvemmin - 2,5-3 viikon kuluttua. Tutkimuksen aikana tavoitelluista tavoitteista riippuen lääkäri määrää tietyn tyyppisen testin.

On olemassa seuraavia PCR-tyyppejä:

  1. Laadullinen. Diagnostisia testejä määrättäessä potilailla on kysymys siitä, mitä tämä tutkimusmenetelmä osoittaa. Laadullinen analyysi PCR-menetelmällä on erittäin herkkä testi, joka määrittää viruksen RNA: n läsnäolon veressä minimipitoisuudella. Tyypillisesti tällainen polymeraasiketjureaktio suoritetaan käänteiskopiointitekniikkaa käyttäen. Tämä on yksi harvoista PCR-menetelmistä, joissa RNA: ta voidaan käyttää kohteena.
  2. Määrällinen. Hepatiitti C -määrityksen avulla voit määrittää veressä olevan HCV-RNA: n tarkan tason. Tutkimus on mahdollista vain yhdellä tavalla - reaaliaikaisella menetelmällä. Valmistettaessa materiaalia PCR: ään näytteeseen lisätään väriainetta. Jokaisen monistussyklin jälkeen suoritetaan automatisoitu, reaaliaikainen kvantitatiivinen tutkimus. Tekniikka suoritetaan usein yhdessä käänteiskopioinnin kanssa. Siten on mahdollista määrittää kvalitatiivisesti viruksen RNA-kopioiden pieni määrä. On järkevää määrittää HCV-RNA-taso kvantitatiivisesti, jos saavutetaan positiivinen tulos kvalitatiivisesta PCR: stä..
  3. Genotyyppien määrittäminen. Analyysi suoritetaan diagnostisen prosessin viimeisessä vaiheessa. Tutkimuksen periaate perustuu eroon nukleotidisekvenssissä, joka erottaa hepatiitti C -viruksen yhden genotyypin toisesta. Yleensä analyysi tehdään multi-aluke (multiplex) PCR: llä.

Jos epäilet viruksen kantajaa, on suoritettava korkealaatuinen PCR. Jos tulos on negatiivinen, henkilö on todennäköisesti terve. Mutta infektion sulkemiseksi kokonaan pois, on suositeltavaa toistaa tutkimus 7-10 päivän kuluttua. Jos viruksen RNA havaitaan, suoritetaan lisätestejä (kvantitatiivinen ja genotyypin määritys).

Indikaatiot laboratoriotestille

Tärkein indikaatio veren luovuttamiseksi hepatiitti C: lle polymeraasiketjureaktiomenetelmällä on positiivinen entsyymi-immunomääritys (tyypistä riippumatta: Yhteensä, eriytetty testi IgG: lle ja IgM: lle).

Lisäksi sinun on tarkistettava:

  • raskauden aikana (testi tehdään kahdesti - ensimmäisen kolmanneksen aikana ja 7-10 viikkoa ennen syntymää);
  • työskenneltäessä lisääntyneen infektioriskin kanssa (sairaanhoitajat, laboratorioavustajat, luovuttajakeskusten työntekijät, kosmetologit jne.);
  • räikeällä yhdynnällä ja suojaamattomassa kosketuksessa tuntemattoman henkilön kanssa;
  • HIV: n, syövän, tiettyjen lääkkeiden jne. taustalla;
  • potilaat, jotka ovat riippuvaisia ​​suonensisäisistä lääkkeistä;
  • invasiivisten diagnostisten tai terapeuttisten toimenpiteiden jatkuvalla suorittamisella;
  • ennen vuotta 1992 suoritetulla verensiirrolla (aiemmin ei ollut luotettavia tapoja tarkistaa luovuttajan biologisen materiaalin viruksen esiintymistä).
  • kun avoin haava joutuu kosketuksiin jonkun toisen veren, steriloimattomien lääkinnällisten instrumenttien kanssa.

Ilmaantuvuus kasvaa vuosittain. Siksi infektion varhaisessa havaitsemiseksi suositellaan laboratoriotestejä HCV: lle kerran vuodessa..

Missä testata

Kun hän ottaa yhteyttä klinikkaan, potilaalla on oikeus ilmaisiin kokeisiin. Mutta ensin he suorittavat ELISA-testin. Ja vain positiivisella tai epäilyttävällä tuloksella esitetään PCR-tutkimus. Siksi kiireellinen diagnoosi voidaan tehdä ottamalla yhteyttä maksettuun laboratorioon, jossa voit lahjoittaa verta PCR: ään potilaalle sopivana ajankohtana. Samanaikaisesti on suositeltavaa tarkistaa välittömästi maksaentsyymien indikaattorit, standardit kliiniset veriparametrit.

Veritutkimus PCR: llä on pääsääntöisesti saatavilla miltei missä tahansa laboratoriossa. Jos veren keräyspisteessä ei ole asianmukaisia ​​laitteita, biologinen materiaali kuljetetaan tutkimusta varten lämpötilan ja muiden olosuhteiden mukaisesti. PCR klinikalla on mahdollista vasta muiden tutkimusten jälkeen, joiden tulokset osoittavat epäsuorasti hepatiitti C: n esiintymisen.

Kuinka luovuttaa verta oikein

Ennen kuin luovutat verta mahdollisen viruksen havaitsemiseksi, sinun on noudatettava useita sääntöjä analyysin valmistelemiseksi..

Tärkeimmät näkökohdat on mainittu muistiossa:

  1. Luopu 5-7 päivän ajan rasvaisten, paistettujen ruokien, alkoholin käytöstä. Yleensä lääkärit suosittelevat ruokavalion 5 ravitsemussääntöjen noudattamista.
  2. Älä syö 12-14 tuntia ennen tutkimusta. Voit juoda vain vettä.
  3. On parempi luovuttaa verta aamulla..
  4. Älä tupakoi ennen toimenpidettä.

Sinun tulisi myös varoittaa lääkäriä otetuista lääkkeistä, mahdollisista terveysongelmista, kroonisista sairauksista..

Veri otetaan verisuonesta. Menettelyn päätyttyä sairaanhoitaja tiivistää pistokohdan steriilillä laastilla, varoittaa tarpeesta taivuttaa käsivartta ja pitää sitä tässä asennossa 10-15 minuutin ajan. Muuten tuskallisen hematooman todennäköisyys on suuri..

Kuinka kauan tutkimus kestää?

Kuinka paljon analyysejä tehdään, riippuu laboratoriosta. Keskimääräinen läpimenoaika vaihtelee 1-3 päivän välillä. Jotkut klinikat tarjoavat maksullisen palvelun nopeaan PCR-testaukseen, mutta aikaa rajoittavat lääkinnällisten laitteiden ominaisuudet..

Klinikalla tulokset voidaan välittää lääkärille 7-10 päivän kuluessa. Tähän liittyy suuri potilasvirta. Samaan aikaan biologista materiaalia varastoidaan kaikkien vaatimusten mukaisesti.

Tulosten dekoodaus

Laadukkaan PCR: n dekoodaus ei pääsääntöisesti ole vaikeaa. Mutta väärinkäsitysten välttämiseksi sinun tulee ottaa yhteyttä lääkäriin laboratoriosta saadulla lomakkeella. Vaihtoehdot, mikä tarkoittaa tämän tyyppistä PCR: ää, on esitetty taulukossa.

Negatiivinen: henkilö on terve tai virus-RNA-pitoisuus veressä on liian pieni havaitsemiseksi.

Positiivinen: henkilö on saanut tartunnan

Suoritetaan, jos viruksen RNA havaitaan kvalitatiivisella tutkimusmenetelmällä.

Saatujen testitulosten mukaan viruksen kuormitustaso määritetään

Suoritettu hepatiitti C: lle, vahvistettu muilla tutkimusmenetelmillä.

Analyysin avulla voit määrittää patologian patogeenin tarkan genotyypin

Mutta usein syntyy tilanne, kun hepatiitti C: n ELISA on positiivinen ja PCR on negatiivinen. Vain lääkäri voi tulkita tällaiset testitulokset..

Tällaiset tiedot ovat kuitenkin mahdollisia seuraavissa tapauksissa:

  • raskaus;
  • siirretään akuutissa muodossa hepatiitti C;
  • HCV-hoito päättynyt;
  • infektioiden esiintyminen, jotka lisäävät väärän positiivisen ELISA-tuloksen todennäköisyyttä.

Vain polymeraasiketjureaktio osoittaa virusinfektion tarkan läsnäolon kehossa. Negatiivisen PCR: n taustalla positiivinen ELISA osoittaa useimmissa tapauksissa, että henkilö ei ole saanut tartunnan. Mutta lääkärin tulisi määrittää väärän positiivisen tuloksen tarkka syy..

Laadullinen analyysi

Hepatiitti C: n kvalitatiivinen PCR-analyysi vahvistaa taudinaiheuttajan läsnäolon veressä. Jos viruksen RNA: ta ei havaita, henkilö on terve. Mutta jos epäillään infektiota, on suositeltavaa suorittaa tutkimus uudelleen. Positiivinen tulos osoittaa infektion. Mutta tämä analyysi ei salli kroonisen hepatiitti C: n erottamista akuutista, eikä se voi osoittaa, kuinka aktiivinen patologinen prosessi on..

Kvantitatiivinen testi

Kvantitatiivinen analyysi PCR: llä suoritetaan diagnoosin vahvistamisen jälkeen ja sen dekoodaus on tärkeää hoitotaktiikan määrittämisessä. Hepatiitti C: n aiheuttajan hiukkasten pitoisuuksista riippuen erotetaan useita viruksen kuormitusasteita: keskitaso, korkea ja matala. Mitä korkeampi indikaattori, sitä vakavampi infektio on ja sitä vaikeampi hoito on. Normaalisti viruksen RNA: ta ei ole veressä.

Genotyyppien määrittäminen

Monet laboratoriot tekevät genotyypin määrällisen PCR: n yhteydessä, mikä säästää rahaa. Tällainen tutkimus tehdään vain kerran, ennen hoidon aloittamista. Yleensä analyysi suoritetaan yhdelle neljästä yleisimmistä genotyypeistä (1, 2, 3 tai 4). HCV-alatyyppi määritetään samaan aikaan. Hepatiitti C -alalajien 5 ja 6 genotyyppien määrittäminen ei ole mahdollista kaikissa laboratorioissa.

Plussat PCR-diagnostiikasta

Diagnoosi PCR-menetelmällä on yleistä seuraavista syistä:

  • korkea tarkkuus (edellyttäen, että käytetään uusimman sukupolven testausjärjestelmiä);
  • biomateriaalin näytteenoton helppous;
  • nopeita tuloksia (enintään 5 päivää).

Mutta tärkein etu on tutkimuksen laaja diagnostiikkakyky. Analyysin avulla ei voida vain tunnistaa virusta, vaan myös määrittää sen pitoisuus kehossa tarkasti ja määrittää infektion genotyyppi. Lisäksi tarvitaan kvantitatiivista tutkimusta antiviraalisen hoidon tehokkuuden arvioimiseksi. Hoidon päätavoitteena on saavuttaa testinopeus (ts. HCV-RNA: n havaitsematon taso) 4, 12 tai 24 viikkoa antiviraalisen kurssin aikana ja ylläpitää tämä tulos.

Kustannukset

PCR-analyysin hinta vaihtelee alueittain. Joten Moskovassa hinnat ovat korkeammat. Laadukas PCR maksaa 600-800 ruplaa, määrällinen - 2200-3000 ruplaa, genotyypin määritys - 1000 ruplaa. Voit selvittää, kuinka paljon tietty tutkimus maksaa suoraan laboratoriosta, lääketieteellisen organisaation verkkosivustolta tai puhelimitse.

Laadullinen analyysi hepatiitti C: lle: transkriptio

Virushepatiitti C: n kehittymisen syy on Flaviviridae-perheeseen kuuluvan patogeenin aiheuttama infektio. Infektion ja vasta-ainetuotannon alkamisen välillä havaitaan pitkä aikaväli, mikä ei salli taudin oikea-aikaista diagnosointia entsyymi-immunomäärityksen avulla.

Hepatiitti C: n PCR-analyysi, biokemia, CBC, maksatestit suoritetaan, jos epäillään infektiota. Polymeraasiketjureaktiolla on mahdollista havaita virus verestä jo infektion ensimmäisellä viikolla, mikä on menetelmän hallitseva etu.

Kvantitatiivinen ja kvalitatiivinen hepatiitti C -analyysi ja tutkimuksen ominaisuudet, miten valmistautua, onko virheitä, dekoodaus - harkitsemme yksityiskohtaisesti.

Mikä on polymeraasiketjureaktiomenetelmä?

Polymeraasiketjureaktio on molekyylitutkimusmenetelmä virusagentin geneettisen materiaalin määrittämiseksi tartunnan ensimmäisistä päivistä lähtien. Analyysille on ominaista korkea luotettavuus, spesifisyys ja tarkkuus. Hänen ansiostaan ​​viruksen puuttumisen / läsnäolon lisäksi havaitaan myös viruksen kuormitus (kvantitatiivinen arvo), genotyyppi.

Tutkimusta varten tarvitaan potilaan verta, jossa oletettavasti sijaitsee virusinfektion RNA. Laboratorio-olosuhteissa alukkeita lisätään biologiseen nesteeseen - nämä ovat keinotekoisesti syntetisoituja lyhyen pituisen halutun geenin fragmentteja. Plus RNA-polymeraasi - erikoistunut entsyymi, joka kertoo halutun materiaalin pitoisuuden.

Lisäksi veri, johon on lisätty komponentteja, kuumennetaan ja jäähdytetään useita kertoja erityisellä laitteella. Sen jälkeen tulee saatujen tulosten analyysi, vertailu virusagentin tunnettuihin geeneihin. Tämän perusteella tehdään johtopäätös taudista.

PCR-tutkimuksen lajikkeet

C-hepatiitti-PCR-analyysi suoritetaan laboratoriossa lisäämällä tarvittavia reagensseja, sillä on kolme lajiketta, joilla on erottuvat ominaisuudet:

  1. Laadullinen PCR-analyysi hepatiitti C: lle on tutkimuksen ensimmäinen vaihe. Sen kautta patogeenin geneettinen materiaali havaitaan veriseerumissa.
  2. Kvantitatiivisen tutkimuksen avulla voit arvioida viruspitoisuuden - tämä on virtamateriaalin sisältö 1 ml: ssa potilaan verta. Se suoritetaan ennen hoidon aloittamista ja sitten 1-4-12 viikon hoidon jälkeen. Kun kurssi on pitkä, tutkimus on suoritettava 24 viikon hoidon jälkeen tehokkuuden arvioimiseksi.
  3. Genotyyppien määrittäminen. Tartuntatauti kehittyy nopeasti, viruksella on taipumus mutatoitua. Siksi on tarpeen tunnistaa viruksen genotyyppi.

Tutkijat ovat tunnistaneet 7 viruksen genotyyppiä. Venäjän federaatiossa 1-2-3 lajia ovat hyvin yleisiä.

Jokaiselle genotyypille on ominaista resistenssi hoidolle.

Esimerkiksi tyypin 1 hoidon tehokkuus on noin 60%, 2-3 tyypin taustalla indikaattori saavuttaa 85%.

Oikeiden lääkkeiden löytämiseksi, hoidon kesto, on tunnistettava infektion lisäksi myös viruksen pitoisuus, sen genotyyppi.

Käyttöaiheet

Hepatiitti-, PCR- ja ELISA-merkkiaineilla, muilla testeillä on tiettyjä lääketieteellisiä käyttöaiheita:

  • Kun potilaalla on ollut HIV-infektio, AIDS.
  • Yhteys tartunnan saaneen henkilön kanssa, koska virushepatiitti on erittäin tarttuvaa.
  • Maksakirroosin oireet - hepatomegalia, pernan koon kasvu, vatsaan ilmestyi laskimokuvio jne..
  • Toiminnallisten maksasairauksien klinikka - ajoittainen / jatkuva kipu oikeassa hypochondriumissa, ihon keltaisuus, pahoinvointi.
  • Korkeat ASAT- ja ALAT-arvot veren biokemiassa.
  • Raskauden aikana, kun maksan toimintakokeet ovat huonot.
  • Ennen viruslääkityksen aloittamista viruskuorman määrittämiseksi.
  • Hoidon tehokkuuden seuranta.
  • Hoidon jälkeen virusinfektioiden uusiutumisen estämiseksi.

PCR suoritetaan vahvistetulla hepatiitti B -diagnoosilla sekamuotoisen maksavaurion poissulkemiseksi.

Tutkimuksen valmistelu ja näytteenotto

Lääkäri kertoo kuinka valmistautua analyysiin. Valmistelua suositellaan potilaalle tarkan tuloksen saamiseksi. Se koostuu seuraavista suosituksista:

  1. Analyysi on tehtävä aamulla tyhjään vatsaan. Ennen veren ottamista saa juoda vain puhdasta, hiilihapotonta vettä. Viimeinen ateria - 8 tuntia ennen keruuta.
  2. Jos et saa testiä aamulla, voit tehdä sen illalla tai lounasaikaan, mikä tärkeintä - 5-6 tuntia syömisen jälkeen, ei aikaisemmin.
  3. Hylkää alkoholijuomat, kofeiinijuomat, mehut 48 tuntia ennen tutkimusta.
  4. 2 päivän ajan sinun on noudatettava ruokavaliota, lukuun ottamatta kaikkia haitallisia tuotteita. Jotkut lääkärit uskovat, että rasvaiset, paistetut elintarvikkeet eivät vaikuta PCR-testin tarkkuuteen..

Älä ota lääkkeitä 24 tuntia ennen toimenpidettä. Jos tämä ei ole mahdollista, kerro siitä lääkärillesi. Analyysiä ei suositella suoritettavaksi heti ultraäänen, TT: n, hieronnan ja muiden fysioterapiatoimenpiteiden jälkeen.

Verinäyte otetaan seuraavasti:

  • Potilaan käsivarteen kiristetyllä erityisellä kiristysnauhalla lääkäri pysäyttää laskimoverenkierron. Suonet tulevat näkyvämmiksi, mikä helpottaa neulan asettamista ja sitten veren ottamista.
  • Ihon alue ennen steriilin neulan asettamista käsitellään alkoholia sisältävällä nesteellä.
  • Neula työnnetään laskimoon, sitten siihen kiinnitetään koeputki, johon syötetään verta.
  • Neulan asettamisen jälkeen kiristysnauha poistetaan. Kerää tarvittava määrä verta, poista neula.
  • Alkoholiin kastettu vanupuikko asetetaan pistoskohtaan.

Mustelman muodostumisen estämiseksi neulan pistoskohdassa on tarpeen painaa vanupuikko riittävän kovasti loukkaantuneelle alueelle, taivuttaa käsivartta ja pitää sitä tässä asennossa 3-4 minuuttia.

Jos potilas ottaa veren ohentavia lääkkeitä (aspiriini, varfariini), verenvuodon pysäyttämisessä voi olla tiettyjä ongelmia.

PCR: n edut muihin testeihin verrattuna

Polymeraasiketjureaktiomenetelmällä on tiettyjä etuja muihin diagnostisiin tekniikoihin verrattuna..

Tutkimuksen edut on esitetty taulukossa:

Tutkimuksen tyyppiMahdollinen tulos ja aiottu transkriptio
Laadukas PCR
Määrällinen
Genotyyppien määrittäminen
Patologian aiheuttajan suora diagnoosiMuiden tutkimusten avulla voimme antaa vastauksen - onko kehossa taudinaiheuttajaa vai ei. Mutta käyttämällä PCR-tekniikoita, voit määrittää nimenomaan viruksen tekijän tyypin.
Tutkimuksen spesifisyysPCR havaitsee ainutlaatuisen palan DNA: ta, joka sopii vain yhteen virustyyppityyppiin. Tämä minimoi virheiden mahdollisuuden..
Suuri herkkyysasteJopa vähäinen viruskonsentraatio veressä voidaan havaita.
Kaikkien taudinaiheuttajien määrittäminenTutkimuksen aikana kaikki patogeenit voidaan havaita.
Piilevät infektiotViruspatogeenin lisäksi voidaan havaita infektioita, joilla on piilevä kulku, jotka erottuvat korkealla antigeenisella aktiivisuudella..

Kun potilas saa positiivisen tuloksen, se tarkoittaa, että hepatiitin aiheuttajan geneettinen materiaali on löydetty biologisesta nesteestä. Negatiivinen kokonaismäärä - ei viruksen jälkiä.

Tulosten dekoodaus

Lääkärin tulisi tulkita tulokset potilaan laboratoriossa saaman johtopäätöksen perusteella. Tiedot on analysoitava yhdessä biokemian, CBC: n, ultraäänen indikaattoreiden kanssa.

Laadullinen

Laadullinen tutkimus osoittaa virustaudin aiheuttajan esiintymisen tai puuttumisen ihmisen veressä. Vaihtoehtoja voi olla kaksi - negatiivinen (normi) tai positiivinen tulos.

Lomakkeessa sanotaan joskus: löytyi tai ei löydy.

Positiivinen tulos - laboratorion assistentti havaitsi virusagentin geneettisen materiaalin potilaan veressä, infektio vahvistettiin. Negatiivinen johtopäätös - infektiota ei ole, viruksen RNA-fragmentit ovat herkkyysrajojen alapuolella.

Määrällinen

Kvantitatiivinen analyysi edellyttää useita vaihtoehtoja tuloksille. Mukavuuden vuoksi esittelemme ne taulukon muodossa..

TulosDekoodaus
NegatiivinenTämä on normi terveelle ihmiselle. Tämä tarkoittaa, että tutkitussa biologisessa materiaalissa ei ole virushepatiitti-RNA: ta tai sisältö on alle herkkyysrajan.
Enintään 1,8 * 10 ^ 2 IU / mlOsoittaa, että RNA-pitoisuus on pienempi kuin kvantifiointialue. Tulosta on tulkittava huolellisesti, koska sitä pidetään kiistanalaisena. Lisäksi suoritetaan muita tutkimuksia myöhempää vertailua varten. Toista myös PCR-testi.
Jopa 8 * 10 ^ 5 IU / mlAlhainen viruskuorma. Yleensä tämä tulos tarkoittaa, että hoito on tehokasta..
Alkaen 8 * 10 ^ 5 IU / mlSuuri viruskuorma. Hoito on tarpeen välittömästi (ellei sitä suoriteta) tai lääkityksen korjaaminen on tarpeen.
2,4 * 10 ^ 7 IU / mlRNA on suurempi kuin ylempi kvantifiointimaksimi. Tätä taustaa vasten viruskuormitusta ei arvioida. Toinen tutkimus, jossa laimennetaan biologista nestenäytettä, vaaditaan.

Genotyyppien määrittäminen

Tulos - spesifisen genotyypin ribonukleiinihappo löydettiin. Lisäksi ilmoitetaan genotyyppi ja alatyyppi, laboratorioassistentti koodaa johtopäätöksen latinalaisin kirjaimin ja numeroin. Esimerkiksi genotyyppi 1a. Yhteensä 7 genotyyppiä, 67 alatyyppiä erotetaan.

Tulos - havaittiin hepatiitti C -viruksen RNA - tämä on harvinaista genotyyppiä oleva DNA, jota ei voida liittää yleisiin virustaineisiin, joten tarvitaan lisädiagnostiikkaa.

Kun PCR on negatiivinen ja ELISA positiivinen

Selvittää laboratorioavustajan hepatologin tai tartuntatautien asiantuntijan johtopäätökset. On aina olemassa riski saada väärä negatiivinen tai väärä positiivinen tulos. Joskus tapahtuu, että PCR on negatiivinen ja ELISA on positiivinen.

Tämä tarkoittaa, että potilaan veressä ei tällä hetkellä ole virusta, mutta hänellä on ollut akuutti sairaus. Yleisesti uskotaan, että ELISA osoittaa vasta-aineita, joita immuunijärjestelmä tuottaa patogeenin tunkeutumisen jälkeen kehoon..

ELISA: lle on PCR: ään verrattuna ominaista alhainen luotettavuus ja luotettavuus, joten sitä käytetään ensisijaisena seulonnana. Virushepatiitin diagnosoinnissa polymeraasiketjureaktio on välttämätön.

Hepatiitti C -testauksen kustannukset

Voit tehdä testejä sairaalassa, jossa potilasta tarkkaillaan, jos siellä on laboratorio, tai voit mennä yksityiseen keskukseen maksullisesti.

Lyhyessä ajassa voit saada tuloksen laboratoriokeskuksissa, kuten Gemotest, Invitro, Helix.

Tutkimuskustannukset laboratoriosta riippuen:

Laboratorion nimiHintapolitiikka
Helix· Biologisen materiaalin näytteenottokustannukset - 170 ruplaa.

Laadullinen + kvantitatiivinen tutkimus PCR-menetelmällä - 3990 ruplaa.

Virustaudin vasta-aineiden havaitseminen - 1500 ruplaa (2-3 päivää).

Viruksen aktiivisuuden tarkistaminen ennen hoidon aloittamista - 4090 ruplaa.

InvitroHepatiitti C -viruksen RNA: n kvantitatiivinen havaitseminen PCR: llä - 3140 ruplaa.

Biologisen materiaalin (laskimoveri) kerääminen - 199 ruplaa.

Viruskuormituksen arviointi reaaliaikaisella tunnistuksella - 18000 ruplaa.

Laadukas ultraherkkä testi - 3000 ruplaa.

Genotyypin määritys - 1250 ruplaa.

HemotestMäärällinen tutkimushinta 2200 ruplaa.

Laadukas diagnostiikka 700 ruplaa.

Taudinaiheuttajan RNA: n määrittäminen - 4000 ruplaa.

Verinäyte laskimosta noin 150 ruplaa.

Tutkimuksen kesto on keskimäärin 2-3 päivää. Joissakin laboratorioissa on palvelu kiireellisenä analyysinä, sen kustannukset ovat 1,5-2 kertaa korkeammat. On myös mahdollista soittaa lääkäriin kotiin verta luovuttamaan, ja tulokset voidaan saada sähköpostitse tai henkilökohtaisesti laboratorioon ottaessasi yhteyttä..

Hepatiitin PCR-diagnostiikka: miten tulkita, taulukko

Hepatiitin PCR-analyysi - mikä se on ja miksi se tehdään

PCR-analyysin ydin on, että osa tutkittavasta geenistä pakotetaan lisääntymään koeputkessa käyttämällä erityisiä entsyymejä ja olosuhteita. Hepatiittivirusten PCR-analyysi antaa sinun määrittää viruskanta, jota ilman on mahdotonta suorittaa tehokasta hoitoa: kukin genotyyppi on eri herkkyys viruslääkkeille.

Käytetään kahta PCR-tyyppiä:

  • laadullinen;
  • määrällinen.

Antiviraalinen hoito tarvitsee jatkuvaa seurantaa hoidon oikeaan säätämiseen; näihin tarkoituksiin käytetään myös polymeraasiketjureaktiota.

Laadullinen ja kvantitatiivinen PCR

Hepatiitin laadullinen PCR antaa vastauksen: onko potilaan veressä viruskantaa ja mikä. Genotyypin määritys on tarpeen diagnoosin, taudin ennusteen selventämiseksi ja hoidon ajoituksen määrittämiseksi.

Kun viruksen läsnäolo on varmistettu, suoritetaan kvantitatiivinen PCR hepatiitille, jonka avulla lasketaan RNA-molekyylien määrä potilaan laboratorionäytteessä.

Valmistelu hepatiitin PCR-analyysiin

Polymeraasireaktiomenetelmällä tehtävään analyysiin tarvitaan laskimoverta. Tämä on tehtävä aamulla tyhjään vatsaan..

Potilaan tulee valmistautua tutkimukseen asianmukaisesti:

  • 10 tuntia kieltäytyäksesi ruoasta, voit juoda vain puhdasta vettä.
  • Lopeta alkoholin käyttö edellisenä päivänä, älä tupakoi 4 tuntia.
  • Fyysistä ja henkistä stressiä tulisi välttää ennen tutkimusta..
  • Jos tämä ei ole mahdollista, huumeiden käytön lopettamiseksi 2 päivän ajan, sinun on varoitettava laboranttia. Jotkut lääkkeet vaikuttavat lopputulokseen.

Hepatiitti C: n PCR-analyysi

Jos hepatiitti C: n PCR-testi antaa positiivisen tuloksen, se osoittaa, että patogeeninen mikro-organismi jakaa ja tartuttaa jatkuvasti maksasoluja.

Seuraava hepatiitti C: n kvantitatiivinen PCR mitataan kansainvälisissä yksiköissä / 1 ml tai IU / ml, mikä tarkoittaa, kuinka monta kopiota tietyn C-viruskannan ribonukleiinihaposta löytyy 1 ml: sta testiverta.

Seuraavassa taulukossa esitetään hepatiitti C: n kvantitatiivisen tutkimuksen dekoodaus PCR-menetelmällä:

Viruskuormitus, kopioita / mlKuormituksen arviointiTaudinaiheuttajan replikaation luonne
103 ja vähemmänErittäin matalaEpäaktiivinen
104 - 105MatalaUsein ei-aktiivinen
106KohtalainenAktiivinen
107IsoErittäin aktiivinen
  1. Alhainen viruskuormitus on merkki siitä, että terapeuttinen hoito on valittu oikein, ja ennuste paranemista hepatiitti C: lle on suotuisa.
  2. Suuri virussolujen pitoisuus osoittaa, että tauti on akuutissa vaiheessa. Potilaan veri on vaarallinen infektiolähde.
  3. Viruskuormitus, jonka indikaattorit ovat keskimääräisellä tasolla, luonnehtii joko HVS: n kroonista vaihetta tai sillä voi olla kaksi kehityssuuntaa: kohti sen kasvua tai laskua.

Kvantitatiivinen PCR-analyysi hepatiitti C: lle suoritetaan koko viruslääkityksen ajan: 4, 12 ja 24 viikon kuluttua, jonka tarkoituksena on vähentää viruksen määrää.

Lopussa - 6 kuukauden kuluttua tehdään PCR-kontrolli.

Hepatiitti B: n PCR-analyysi

Hepatiitti B (B): n PCR-analyysi suoritetaan infektion (HBV DNA) havaitsemiseksi.

HBV-DNA-pitoisuus mitataan kopioina / ml tai me / ml. Tutkimuksen tuloksia arvioitaessa ne ohjaavat seuraavia indikaattoreita:

  • 2x10 ^ 6 - 95 prosentissa tapauksista tulee krooninen.

Dekoodaa hepatiitin PCR-analyysi

Laadullisella PCR-analyysillä on kaksi vastausta:

  1. negatiivinen;
  2. positiivinen.

PCR-negatiivinen tarkoittaa, ettei verinäytteistä löydetty patogeenia.

Tuloksen luotettavuuden todennäköisyys on 95%. Loput 5% on inhimillinen virhe. Tämä mahdollisuus on sallittu tutkimuksen korkeiden vaatimusten vuoksi:

  • reagenssien varastointisäännöt;
  • lääketieteellisen henkilöstön asianmukainen pätevyys
  • biomateriaalin puhtaus.

Itse PCR-sarjalla on 100%: n diagnostinen tarkkuus.

Kvantitatiivinen PCR hepatiitille antaa sinun määrittää potilaan kehon viruskuormitus. Hänen avustaan:

  • taudin vaihe on määritelty (akuutti, krooninen);
  • viruslääkehoidon tehokkuus määritetään;
  • maksabiopsian tarve määritetään.

Joissakin tapauksissa potilas ei tunne mitään taudin merkkejä, kun taas PCR-menetelmä on saanut tartunnan. Tämä tarkoittaa, että tauti on alkuvaiheessa tai kroonisessa muodossa. Diagnoosin selventämiseksi tarvitaan lisätutkimuksia, jotta viruslääkkeet voidaan aloittaa varhaisessa vaiheessa.

PCR-diagnostiikan kustannukset

Valtion klinikat tekevät verikokeen PCR: lle ilmaiseksi, jos tartuntatautien erikoislääkäri tai hepatologi lähettää lähetyksen.

PCR-diagnostiikan maksullisia palveluja tarjotaan kaikissa Venäjän suurimmissa kaupungeissa. Kustannukset riippuvat testityypistä, käytettävissä olevista laitteista, ajoituksesta ja muista tekijöistä.

  • Korkealaatuinen PCR-analyysi Moskovassa ja Pietarissa maksaa 600-900 ruplaa. Alueilla - 300-800 ruplaa.
  • Hepatiitti C: n viruspitoisuuden määrittäminen maksaa 17 000 - 22 000 ruplaa. Hepatiitti B (B) -määrän kvantitatiivisen tutkimuksen hinta: 1200-10000 ruplaa.

PCR-menetelmän edut ja haitat

Mitkä ovat polymeraasiketjureaktiomenetelmän edut muihin diagnostisiin menetelmiin verrattuna?

  1. Laaja valikoima sovelluksia. PCR: llä, vakiovarusteena, voit tunnistaa minkä tahansa viruksen.
  2. Taudinaiheuttajan määrittämisen tarkkuus. Käyttämällä erilaisia ​​entsyymien ja määritystekniikoiden yhdistelmiä saavutetaan 100% testispesifikaatio osoitetulle infektiolle.
  3. Yliherkkyys. Tekniikan avulla voit havaita yhden viruksen molekyylin läsnäolon veressä.
  4. Tehokkuus. Laadullinen analyysi on valmis muutamassa tunnissa, kvantitatiivinen analyysi kahdessa päivässä.
  5. Viruksen diagnoosi inkubointijakson aikana. PCR: n avulla taudinaiheuttaja ei määritetä vasta-aineiden läsnäololla, kun kehon immuunivaste on jo olemassa, mutta ennen hoidon helpottavaa patologista prosessia..

PCR-analyysin haitat ovat seurausta sen eduista:

  • analyysin puhtauden kannalta vaaditaan korkeinta puhtausastetta, mukaan lukien laboratoriossa oleva ilma, jotta "vieras" DNA ei pääse tutkittavaan näytteeseen;
  • korkeat vaatimukset biomateriaalin näytteenoton ja analysoinnin suorittavalle henkilöstölle.

Saavutettujen tulosten arvioinnin tekee hoitava lääkäri, joka osaa erottaa todellisen analyysin väärästä positiivisesta (kun hoito on jo saatu päätökseen, mutta elinkelvoton virus pysyy veressä) ja väärän negatiivisen (kun virusta ei havaita kliinisessä kuvassa).

Hepatiitti C: n PCR-analyysi

Kroonisen virushepatiitti C: n (CVHC) diagnosoimiseksi tarvitaan henkilön kattava tutkimus, joka sisältää kliiniset, laboratorio- ja instrumentaalitutkimukset. Diagnoosin kannalta oikean diagnoosin tekemiseksi on PCR-menetelmä - polymeraasiketjureaktio.

Mitä tämä analyysi osoittaa ja miksi sitä tarvitaan?

Tämä laboratoriomenetelmä havaitsee hepatiitti C -viruksen RNA: n ihmisen veressä. Yhdessä entsyymiin liittyvän immunosorbenttimäärityksen (ELISA) kanssa viruksen vasta-aineille, PCR: ää käytetään CVHC: n ja sen aiheuttajan genotyypin diagnosointiin. Tämä tutkimus on yksi uusimmista laboratoriodiagnostiikkamenetelmistä. Sen luotettavuus CVHC: ssä ylittää 97%, jota pidetään erittäin hyvänä tutkimuksen indikaattorina.

CVHC: lle on kolme PCR-verikoketta: viruksen kvalitatiivinen, kvantitatiivinen ja genotyyppinen määritys. Ensimmäinen viruksen tutkimus (kvalitatiivinen analyysi) havaitsee sen veressä, joten sitä käytetään vain diagnoosin tekemiseen.

Toinen (kvantitatiivinen) tutkimus määrittää kehon viruskuormituksen asteen, joten sitä käytetään hoidon tehokkuuden seurantaan.

Kolmas PCR (genotyypitys) selkeyttää diagnoosin määrittämällä viruksen genotyypin, mikä on erittäin tärkeää oikean viruslääkityksen määrittelemiseksi.

Polymeraasiketjureaktiotekniikan ydin on sellaisten entsyymien käyttö, jotka moninkertaistavat patogeenin geneettisen materiaalin biomateriaalissa. Tällaisen replikaation aikana koeputki verellä kuumennetaan ja jäähdytetään useita kertoja entsymaattisen reaktion nopeuttamiseksi tarvittavaan lämpötilaan. Näiden manipulaatioiden seurauksena virusgenomin määrä kasvaa moninkertaisesti, mikä mahdollistaa sen havaitsemisen jopa pienellä määrällä.

PCR-diagnostiikalla on monia etuja verrattuna muihin laboratoriotesteihin:

  • korkea herkkyys - 97-98%;
  • taattu analyyttinen spesifisyys (tunnistaa tarkalleen taudinaiheuttajan, jonka haluat löytää, eikä siihen liittyvää kantaa);
  • suorituksen nopeus (lausunnon saaminen vie enintään 2 päivää).

Kolme PCR-analyysityyppiä

Laadukas PCR-analyysi määrätään kaikille potilaille, joilta CVHC-viruksen vasta-aineita havaittiin ELISA-analyysillä. Laadullisen PCR: n suorittamisen jälkeen voidaan saada kaksi vastauksen muunnosta: "RNA havaittu" tai "RNA: ta ei havaittu". Viruksen vähimmäismäärän havaitsemiseksi tarvitaan testijärjestelmiä, joiden herkkyys on vähintään 50 IU / ml. Jos viruksen pitoisuus potilaan veressä on pienempi kuin diagnoosi voi määrittää, testitulos voi olla vääriä negatiivinen. Tällaisen diagnoosivirheen välttämiseksi PCR-diagnostiikkaa suorittavilla laboratorioilla on oltava erittäin herkät testijärjestelmät. Esimerkiksi "Invitro" -laboratoriossa käytetään testejä, joiden herkkyys on 15 IU / ml. Laboratorion työntekijöiden on annettava potilaiden ja lääkäreiden tiedoksi testien herkkyys heidän ensimmäisestä pyynnöstään..

Kvantitatiivinen PCR-analyysi määrittää viremian asteen, toisin sanoen taudinaiheuttajan pitoisuuden veressä, viruksen määrän. Tämän tutkimuksen tulos, toisin kuin kvalitatiivinen PCR, ilmaistaan ​​numeroina, esimerkiksi 2 × 10 * 6 IU / ml, mikä tarkoittaa 2 miljoonaa kansainvälistä yksikköä 1 ml: ssa verta. Jotkut laboratoriot käyttävät eri indikaattoria - kopioiden lukumäärä / ml. Nämä kaksi indikaattoria on helppo muuntaa: 1 kansainvälinen yksikkö vastaa 4 kopiota RNA: ta. Täten 2 × 10 * 6 IU / ml tarkoittaa, että potilaan verestä löytyy 8 × 10 * 6 kopiota virus-RNA: ta 1 ml: ssa, ts. 8 miljoonaa kopiota 1 ml: ssa verta.

Genotyypitys on määritelmä yhdelle kuudesta viruksen genotyypistä. Kliininen kuva, maksan komplikaatioiden kehittymisnopeus ja potilaan tulevan elämän ennuste riippuvat patogeenin genotyypistä. Viruksen genotyyppi on erittäin tärkeä jo diagnoosin vaiheessa, koska lääkkeiden yhdistelmä ja potilaalle määrättävän terapeuttisen kurssin kesto riippuvat sen oikeasta määritelmästä..

Jopa sellaisella näennäisesti "ihanteellisella" laboratoriotutkimuksella on kuitenkin haittoja:

  • tutkimuksen aikana tapahtuu kaikkien patogeenien, jopa elottomien, geneettisen materiaalin replikaatio, mikä voi vääristää tulosta. Siksi tehokkuuden hallitsemiseksi PCR: llä toistuva analyysi suoritetaan aikaisintaan 2 kuukautta edellisen jälkeen, jotta kuolleilla viruksilla on aikaa "poistua" potilaan kehosta;
  • osa viruksen genomista, joka määritetään testijärjestelmiä käyttäen, voi teoriassa olla läsnä muissa viruksissa tai mikro-organismeissa, joten on mahdollista saada väärä positiivinen vaste;
  • virukset mutatoituvat nopeasti. Joskus viruksen mutaation nopeus ja aste on niin suuri, että testijärjestelmä lopettaa genomin sieppaamisen. Tämän seurauksena väärä negatiivinen tulos on mahdollinen..

Näiden puutteiden korjaamiseksi PCR-diagnostiikkaa varten käytettävien laboratoriotestijärjestelmien valmistajat testaavat niitä jatkuvasti, mukaan lukien ristireaktiot ja herkkyys viruksen tietylle genotyypille..

Kuinka tehdä PCR-testi hepatiitti C: lle?

Jotta tutkimuksen päättäminen PCR-menetelmällä olisi luotettava, on tarpeen noudattaa tarkasti sääntöjä sen valmistelemiseksi:

  • tutkimus tehdään tyhjään vatsaan (glukoosi, rasvat, mineraalit, jotka pääsevät verenkiertoon ruoasta, voivat vaikuttaa entsymaattisen reaktion nopeuteen ja laatuun);
  • viimeisen aterian ja analysoitavan verinäytteen välisen välin on oltava vähintään 8 tuntia;
  • tutkimuksen aattona on kiellettyä ottaa alkoholia ja syödä rasvaisia ​​ruokia, joiden eliminaatioaika on pitkittynyt;
  • päivää ennen laboratorioon menoa voimakasta fyysistä ja henkistä stressiä tulisi välttää;
  • tupakointia ei suositella ennen verinäytteiden ottamista.

Väärien johtopäätösten välttämiseksi väitetyn potilaan tulee tulla laboratorioon vähän aikaisemmin kuin verinäyte otetaan. Henkilöllä kestää 15-20 minuuttia, jotta hän hengähtää ja rauhoittuu. Adrenaliini veressä nopean kävelyn jälkeen voi vaikuttaa testitulokseen.

Jos analyysiin lähetetty potilas ottaa lääkkeitä, hänen on ilmoitettava tästä lääkärille. On mahdollista, että joudut kieltäytymään ottamasta joitain niistä hetkeksi (jos mahdollista).

Hepatiitti C: n PCR-analyysin tulos

Tulosten salauksen käsittelee analyysin suorittaneen laboratorion assistentti. Dekoodaus on määritelmä tuloksen poikkeamisesta normista. Indikaattorien normin asettaa suoraan testijärjestelmän valmistaja, jota laboratorio käyttää diagnostiikkaan. Siksi ei pitäisi olla yllättävää, että joissakin laboratorioissa viruksen määrä määritetään IU / ml ja toisissa - kopioina / ml..

Saatuasi johtopäätöksen sinun on pystyttävä tulkitsemaan se oikein. C-hepatiittipotilaan hoitavan lääkärin tulisi hoitaa testitulosten tulkinta vasta potilaan objektiivisen, instrumentaalisen ja laboratoriotutkimuksen jälkeen, lääkäri voi saada riittävän määrän tietoja saatujen PCR-tulosten pätevään tulkintaan..

Laadullisen analyysin arviointi on yleensä suoraviivaista, myös potilaille. Tuloksia voi olla vain yksi: "löydetty" tai "ei löydy". Lisäksi toinen niistä on normi.

Määrällisiä indikaattoreita on vaikeampaa tulkita. Se osoittaa potilaan viruksen määrän. Jopa hepatologien keskuudessa ei ole yksimielisyyttä siitä, miten havaittua viremiaa tulkitaan. Useimmat lääkärit ovat taipuvaisia ​​uskomaan, että yli 8 × 10 * 5 IU / ml: n kuormitusta on pidettävä suurena. Erittäin korkean kuormituksen katsotaan olevan yli 1 × 10 * 7 IU / ml ja pienen kuormituksen alle 4 × 10 * 5 IU / ml..

Viruskuormituksen aste osoittaa viruksen virulenssin (aggressiivisuuden): mitä enemmän sen määrä veressä, sitä nopeammin maksan komplikaatiot voivat kehittyä. Viruksen suuri pitoisuus raskaana olevan naisen veressä lisää todennäköisyyttä, että virus tunkeutuu sikiöön veri-istukan esteen läpi. Viremia vaikuttaa myös hoidon tehokkuuteen: pienillä määrillä hoidon tehokkuus on korkeampi kuin korkealla.

Hepatiitti C: n PCR-analyysin luotettavuuden varmistamiseksi on etusijalla vain ne laboratoriot, jotka ovat osoittautuneet hyvin. Samaan aikaan hintapolitiikalla ei pitäisi olla ensisijaista roolia..